Post by alamin44700 on Aug 9, 2023 7:00:33 GMT
并进一步用抗 CD3、CD8 和 CD4 抗体（BD Biosciences, San Jose, CA）在 4°C 染色 25 分钟。接下来，用磷酸盐缓冲盐水洗涤细胞3次，重悬于适当体积的FACS缓冲液中，并在分析前与7-AAD (eBioscience, San Diego, CA)一起孵育5分钟。在 FACS Aria (BD Biosciences) 上分析细胞。使用 Flow
Jo 软件（Tree Star，Ashland，OR）分析数据。WT1 -CTL的频Telegram 用户号码列表率(% WT1 -CTL)定义为WT1四聚体+ CD3 + CD8 + T细胞/CD3 + CD8 + T细胞。平均荧光强度——高群体WT1 -CTLs被定义为CD8 + T细胞的四聚体高亲合力群体(tet-hi WT1 -CTLs)。27,28 WT1肽特异性免疫球蛋白的评估 如前所述，通过酶联析抗WT1 235肽的IgG抗体( WT1 235 -IgG)的产生。23特别是，使用肽包被试剂盒 (Ta
kara) 将 0.2 μg WT1 235–252 肽 (CMTWNQMNLGATLKGVAAPKK) 通过 C 末端的附加 PKK 序列修饰以增加溶解度，与 96 孔板的每个孔共价连接。，日本滋贺县）根据制造商的说明。封闭后，将按 1:100 稀释的血清添加至肽包被或肽未包被的孔中，并在 4°C 下孵育过夜。结合WT1 235-使用辣根过氧化物酶缀合的兔抗人 IgG 抗体和辣根过氧化物